Дигидрокодеин и пять метаболитов экстрагировали из проб крови и разделили на колонке Cig (Лвтб = 220 нм, А,м = 340 нм). В ходе 35-минутного элюирования подвижной фазой вода (25 мМ раствор фосфата тетраэтиламмония)/ацетонитрил в объемном отношении 96:4 достигли полного разрешения [1607]. Использовали растворы с концентрацией от 20 до 2000 нг/мл, пределы обнаружения составили 15-25 нг/мл (в зависимости от определяемого соединения).
Ставудин и его метаболит 2',3'-дидегидро-3'-дезокситимидин выделили из плазмы и мочи и определили на колонке С i g (А, = 266 нм) элюированием подвижной фазой вода (10 мМ раствор КН2Р04 до рН 2,5 с НзР04)/ацетонитрил/триэти- ламин в объемном отношении 97:3:1 [1608]. Пики элюировались за 10 мин и были хорошо разрешены. Использовали растворы стандартных образцов с концентрацией от 0,025 до 25 мкг/мл (плазма) и от 2 до 150 мкг/мл (моча). Привели предел обнаружения 12 нг/мл.
Лекарственные смеси салициловой кислоты (СК), кофеина (К), буталбитала (Б) и ацетаминофена (А) проанализировали на непористой колонке С18 (Я = 220 нм). Полное элюирование заняло 3 мин, достигли полного разрешения при отличной форме пиков в ходе каждого из следующих разделений: СК, К и Б разделили элюированием подвижной фазой вода (50 мМ раствор КН2Р04 при рН 3,0)/ацетонитрил в объемном отношении 98:2, тогда как для разделения А, К и Б использовали подвижную фазу вода (50 мМ раствор КН2Р04 при рН 2,5)/ацето- нитрил в объемном отношении 97:3 [1609]. Получили линейные диапазоны 40-6500 нг/мл и пределы обнаружения 5—35 нг/мл (в зависимости от определяемого соединения).
Противоопухолевый препарат 5-фторурацил экстрагировали из плазмы и отделили от урацила и бромурацила (внутренний стандарт) при 25°С на колонке Cjg (Я = 260 нм). При использовании в качестве подвижной фазы 10 мМ водного раствора КН2Р04 до рН 3,0 с Н3Р04 5-фторурацил элюировался при 15 мин, достигли хорошего разделения [1610]. Изучили влияние температуры и ионной силы подвижной фазы на разрешение. Получили линейный диапазон 12,5-10 000 мкг/л и пределы обнаружения 3 мкг/л.
В табл. 10.5 перечислены некоторые распространенные методы USP [590].
10.5. Заключение
Хотя воду редко применяют в качестве единственного компонента подвижной фазы, она является наиболее важным растворителем для ЖХ. Она не только играет решающую роль в нормально-фазовых разделениях, где представляет собой очень сильный растворитель, который может легко дезактивировать хроматогра- фическую поверхность, но вода также используется практически в любом обра- щенно-фазовом разделении. Как следует из вышеизложенного материала, воду с подходящим буфером или ион-парным реагентом можно эффективно использовать при разделениях сильно-полярных соединений. Эти разделения обычно осуществляют в обращенно-фазовом варианте, так что вода является здесь крайне слабым растворителем. Такие разделения обычно проводят без использования каких-либо органических модификаторов подвижной фазы, поскольку время удерживания было бы слишком малым и все пики элюировались бы совместно или с мертвым объемом системы. 10.6. Диметилсульфоксид
Использование ДМСО в качестве компонента подвижной фазы не очень распространено. Он является крайне сильным растворителем, обладающим высокой вязкостью и имеющим высокую величину УФ границы прозрачности. Все эти факторы в сочетании с небезопасностью применения свидетельствуют против его
широкого использования. Как было описано ранее, ДМСО использовали как компонент подвижной фазы, содержащийся в небольших количествах, при разделении ПАУ [746] и изомеров полистирола [857]. Кроме того, ДМСО применяли в некоторых других методах.
Смете с сотр. [1611] определяли хлортетрациклин и четыре побочных продукта его синтеза на колонке С8 элюированием подвижной фазой ДМСО/вода (1 М раствор НСЮ4). Содержание ДМСО в подвижной фазе зависело от выбранной колонки: 19% для Zorbax, 40% для Nucleosil и 50% для Spherisorb. Форма пиков и разрешение были хорошими. Полное элюирование заняло 20 мин. Свед- берг с сотр. [1612] использовали ДМСО для регенерации загрязненных белками колонок С4. Проводили 20-минутное градиентное элюирование подвижной фазой ДМСО/вода в объемном отношении 12:88 —> 80:20.
В экстрактах плазмы новорожденных определяли содержание фотоизомеров билирубина на колонке Cig (А, = 455 нм) посредством 32-минутного градиентного элюирования подвижной фазой (ДМСО/вода [0,1 М буфер ацетата натрия при pH 4,95] 60:40)/ацетонитрил в объемном отношении 80:20 —> 30:70 [1613]. Пики имели хорошую форму, разрешение также было хорошим. Идентифицировали все пики.
Подводя итог, отметим, что ДМСО нашел ограниченное использование в ВЭЖХ из-за высокой вязкости и высокой величины УФ границы прозрачности. Единственной областью, где его можно более широко использовать, являются разделения белков. ДМСО — один из немногих растворителей, даже при высокой концентрации не денатурирующих белки. К сожалению, очень высокая температура кипения ДМСО также исключает работу с пробами, которые необходимо выделить из элюата после элюирования.
|
|
|
АКЦИИ, ПРЕДЛОЖЕНИЯ |
|
Доставка бесплатно! |
Компания «Плазма» предлагает всем новым клиентам бесплатную доставку первого заказа! |
|
| |
НОВОСТИ |
|
15-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" рада сообщить, что с 15 июня 2009 года, появляется новый отдел, теперь мы готовы предоставлять промышленных альпинистов, для работ любой сложности (окраска, мойка, ремонт, реставрация). Все альпинисты имеют соответствующие лицензии. Цены дешевле средних. Звоните, будем рады помочь. |
|
01-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" успешно завершила поставку лакокрасочных материалов для ОАО "РЖД".
Ждем подписания следующего контракта. |
архив новостей...
|
|