X X X А Т
разделили и идентифицировали такие варианты, как р , 8р , а и у . Авторы отметили, что 45 мкл пробы лизата с содержанием 1% гемоглобина F (Hb F) содержали ~50 мкг Hb F, что являлось достаточным для одного анализа методом ВЭЖХ. Формы пиков были хорошими, принимая во внимание значительные времена элюирования для отдельных проб.
Четыре цветных компонента аннато (цис- и транс-норбиксин и -биксин) разделили меньше, чем за 30 мин при 35°С на колонке С18 (X = 452 нм) элюированием подвижной фазой ацетонитрил/вода (2% уксусной кислоты) в объемном отношении 65:35 [1270]. Форма пиков была превосходной. Готовили растворы стандартных образцов, содержащие 0,2% БГТ для предотвращения окисления определяемых соединений. Линейный диапазон для всех соединений составил 40-400 мг/л.
9.5.9. Заключение
Как можно было убедиться, ацетонитрил применяют при разделении соединений, различающихся в широком диапазоне полярностей, составов функциональных групп и размеров, и он, таким образом, является наиболее универсальным растворителем из используемых в настоящее время в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Только в нескольких примерах мы столкнулись с ограничением его применения, связанным с ограниченной растворимостью определяемых соединений в ацетонитриле.
9.6. Аминокислоты, пептиды и белки 9.6.1. Аминокислоты
Ацетонитрил нашел широкое применение в разделениях аминокислот, пептидов и белков. Основным является разделение дериватизированных аминокислот. Классические методы предколоночной дериватизации включают обработку фе- нилизотиоцианатом (ФИТЦ) с получением производных фенилтиогидантоина (ФТГ), диметиламинонафталинсульфонил (дансил) хлорида, о-фтальальдегида (ОФА) и 9-фторметилхлорформиата (ФМХФ). Применяют и различные варианты данных методов. (Некоторые их них указаны в гл. 4.)
Гомогенаты клеток и тканей экстрагировали для получения тиолов, содержащих аминокислоты и родственные соединения (глутатион, дисульфид глутатио- на, цистеин, гомоцистеин [Heys], у-глутилцистеин, цистеинглицин [CG], N-аце- тилцистеин). Эти соединения обработали N-( 1 -гшренил)малеимидом и разделили за 15 мин на колонке С18 (Я,воз6 = 330 нм, = 375 нм) элюированием подвижной фазой ацетонитрил/вода/НзР04 [1271]. Достигли хорошего разрешения всех соединений, кроме Heys и CG. Привели градуировочную кривую в диапазоне от 200 фмоль до 200 пмоль на введенное количество. Достигли пределов обнаружения 100 фмоль.
ОФА является реагентом, обеспечивающим очень низкие пределы обнаружения. При применении схемы флуоресцентного детектирования возбуждение 220 нм / эмиссия 450 нм можно детектировать содержание 50 фмоль [1272]. Основным недостатком ОФА является его неспособность реагировать с вторичными аминокислотами (пролином, гидроксипролином). Также, несмотря на быстроту протекания реакции дериватизации (1-2 мин), некоторые соединения не образуют устойчивых производных (глицин и лизин). Основным преимуществом ОФА является чистота реакции: побочные реакции практически отсутствуют. Пределы обнаружения обычно составляют <1 нмоль. Одним из многих примеров усовершенствованного подхода может служить разделение 25 аминокислот и 2 диаминокислот за 24 мин с отличным разрешением на колонке Си путем очень сложного градиентного элюирования подвижной фазой ацетонитрил/ме- танол/вода (150 мМ раствор ацетата натрия с 10 мМ лимонной кислоты и 1 мМ ЭДТА до pH 4,7). Приведенный линейный диапазон составил 1-1300 пмоль [1273].
|
|
|
АКЦИИ, ПРЕДЛОЖЕНИЯ |
|
Доставка бесплатно! |
Компания «Плазма» предлагает всем новым клиентам бесплатную доставку первого заказа! |
|
| |
НОВОСТИ |
|
15-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" рада сообщить, что с 15 июня 2009 года, появляется новый отдел, теперь мы готовы предоставлять промышленных альпинистов, для работ любой сложности (окраска, мойка, ремонт, реставрация). Все альпинисты имеют соответствующие лицензии. Цены дешевле средних. Звоните, будем рады помочь. |
|
01-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" успешно завершила поставку лакокрасочных материалов для ОАО "РЖД".
Ждем подписания следующего контракта. |
архив новостей...
|
|