Козий р-лактоглобулин выделили из молочной сыворотки и определили на широкопористой колонке С4 (А, = 215 нм) путем сложного 60-минутного градиентного элюирования подвижной фазой вода/ацетонитрил/ТФК в объемном отношении 100:0:0,1 —> 0:100:0,1 [1321]. Р-Лактоглобулин и совместно с ним экстрагированные сывороточный альбумин и а-лактальбумин были полностью разрешены. Полное элюирование заняло 40 мин, пиков, элюирующихся позднее, не наблюдали.
Лизоцим выделили из вин шардоннэ и количественно определили на фениль- ной колонке (X = 225 нм) путем 44-минутного градиентного элюирования подвижной фазой вода/ацетонитрил/ТФК в объемном отношении 98,8:1:0,2 —> 29,8:70:0,2 [1322]. Интересно, что не наблюдали пиков в интервале между 5 мин и элюированием лизоцима при 25 мин; не наблюдалось также пиков, элюирующихся после него. В связи с этим следует рассмотреть изократиче- ское элюирование подвижной фазой приблизительного состава 50:50:0,2. При введении стандартного образца с концентрацией 75 мг/л получили пик с поглощением 0,06.
Армстронг и сотр. [484] изучали некоторые из этих эффектов при разделении рибонуклеазы А, инсулина, цитохрома с, лизоцима, бычьего сывороточного альбумина, миоглобина и овальбумина на колонке Се с использованием 45-минут- ного градиентного элюирования подвижной фазой ацетонитрил/вода (0,1% ТФК) в объемном отношении 10:90 —> 100:0. Достигли хорошего разрешения при хорошей форме пиков. Однако, если эти белки хроматографировали при изократических условиях, график зависимости К от процентного содержания ацетонитрила имел и-образную форму для всех белков [476]. Общее объяснение таково: при низком содержании органических растворителей в подвижной фазе белки остаются в своей нативной конформации и элюируются в результате обычного процесса распределения. С увеличением содержания органических компонентов в подвижной фазе удерживание возрастает, как и предсказывалось. Это свидетельствует о том, что общая конформация белка только слегка изменилась. Дальнейшее возрастание уровня органических компонентов обусловливает конформационные изменения большого масштаба, и обычно внутренние гидрофобные остатки аминокислот вступают в контакт с сорбентом, и теперь частично денатурированный белок удерживается сильнее. Когда подвижная фаза становится полностью органической, эффекты растворимости могут еще более усложнить процесс удерживания. И действительно, расщепленные пики не являются нетипичными в случае использования изократической подвижной фазы и денатурирующей системы растворителей [1323]. Этот эффект, как отмечено выше, имеет место для всех органических компонентов подвижной фазы, но ацетонитрил обычно наименее склонен вызывать денатурацию белков [481].
|
|
|
АКЦИИ, ПРЕДЛОЖЕНИЯ |
|
Доставка бесплатно! |
Компания «Плазма» предлагает всем новым клиентам бесплатную доставку первого заказа! |
|
| |
НОВОСТИ |
|
15-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" рада сообщить, что с 15 июня 2009 года, появляется новый отдел, теперь мы готовы предоставлять промышленных альпинистов, для работ любой сложности (окраска, мойка, ремонт, реставрация). Все альпинисты имеют соответствующие лицензии. Цены дешевле средних. Звоните, будем рады помочь. |
|
01-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" успешно завершила поставку лакокрасочных материалов для ОАО "РЖД".
Ждем подписания следующего контракта. |
архив новостей...
|
|