САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

4.5.9. Заключение

Спирты могут быть крайне эффективны при использовании в разделениях ве­ществ с гидроксильными, карбокси-группами н/или карбоновых кислот. При­сутствие спирта в подвижной фазе почти неизбежно приводит к более четкой форме пиков. Одна составляющая этого связана с конкурентным образованием водородной связи с определяемым веществом за счет уменьшения взаимодейст­вий определяемое вещество — поверхность (которые осуществляются путем об­разования водородной связи с остаточными силанольными группами). Однако спирт играет даже более важную роль, увеличивая растворимость в подвижной фазе, что помогает массопереносу определяемого вещества с поверхности в по­движную фазу. Спирты, даже при малых (10-20%) содержаниях, следует прини­мать во внимание при разделениях веществ, содержащих вышеуказанные функ­циональные группы.

Напротив, спирты не следует использовать при разделении Сахаров. Во-пер- вых, формы пиков, полученных на обычно используемых для этих целей ами- нопропильных колонках, значительно хуже, чем полученных с использованием ацетонитрила. Во-вторых, спирты ускоряют реакцию восстановительных Саха­ров с аминопропильной привитой фазой, протекающую с образованием основа­ния Шиффа [459].

4.6. Аминокислоты, пептиды и белки 4.6.1. Аминокислоты

Определение аминокислот важно не только в клиническом анализе (нарушение метаболизма аминокислот, если не диагностировать его на ранней стадии, может быть смертельным), но и как основа секвенцирования белков и пептидов. Из-за сочетания малого количества вещества, используемого в реальном анализе, и не­достатка хромофоров в большинстве аминокислотных остатков общепринятой практикой является дериватизация. Она может быть выполнена либо перед разде­лением, либо перед детектированием.

Херн и сотр. [460, 461] опубликовали серию результатов, связывающих гид- рофобность аминокислот с обращенно-фазовым удерживанием аминокислот и пептидов. Авторы использовали широкопористые колонки С₄ или Cis и градиен­тное элюирование смесью ИПС/ацетонитрил/вода (0,1% ТФК) для получения результатов. Частью работы были 1738 пептидов, покрывающих 12 полученных ранее шкал гидрофобности аминокислот. Представлены предсказанные и реаль­ные времена удерживания перекрывающихся гептамеров в миогемеритрине. Это и предыдущие исследования, цитируемые здесь, дают превосходные теоре­тическую и экспериментальную основы для предсказательной хроматографии аминокислот и пептидов.