САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

6.2. Обычные определяемые вещества

В большинстве случаев нормально-фазовые разделения являются доминирую­щим способом, посредством которого хроматографически разделяют малые мо­лекулы. Однако применение хлорированных алканов при нормально-фазовом разделении и в некоторых других особых случаях может обеспечить особый под­ход к разделению.

6.2.1. Простые замещенные бензолы

Снайдер и сотр. [606] привели величины времен удерживания для 13 замещенных ароматических соединений на диольной колонке. Изучали влияние изократиче­ских подвижных фаз гексан/дихлорметан (ДХМ), в которых содержание ДХМ си­стематически увеличивали от 5% до 35% (с шагом 5%), а также влияние множест­венных заместителей (например, 1-нитронафталин в сравнении с 1,5-динитро- нафталином), влияние изомера положения (например, 1- в сравнении с 2-нафтилацетатом и 1- в сравнении с 2-ацетонафталином) и влияние функциона­льной группы (например, 1-нитро- в сравнении с 1-циано- и 1-ацетонафталином). Также изучали пять стероидов (преднизон, кортикостерон, адреностерон, 4-анд- ростен- 17р-ол-3-он, 4-андростен-17а-ол-3-он) с использованием подвижных фаз гексан/ДХМ, подобранных таким образом, что полученные для растворенных -

соединений величины к! составили ~ 1, ~0,75, ~0,5 и ~0,1. Процентное содержание ДХМ, при котором достигли величины к! 1,0, составляло от 13% для адреносте- рона до 59% для преднизона. Подобным же образом, при 36% ДХМ величина ^ к! для 4-андростен-17р-ол-3-она составила 0,41, а для преднизона величина ^ к! со­ставляла 0,29 даже при 100% ДХМ. Столь значительное различие в характерах удерживания можно объяснить тем, что преднизон способен образовывать боль­ше водородных связей с оксидом кремния, чем андростенолон, поскольку предни­зон имеет добавочные группы -С=0 и -ОН (см. с. 312).

Тщательно изучили удерживание восьми карбоновых кислот (гиппуровой, гомованилиновой, 4- и 3-гидроксибензойной, 4-гидроксикоричной, 4-аминобен- зойной, 2-гидроксифенилуксусной и 5-гидроксииндол-З-уксусной кислот) на кварцевой колонке с использованием ряда подвижных фаз ДХМ/метанол/вода [744]. Для поддержания кислот в полностью протонированном и незаряженном состоянии добавляли ацетатный буфер. При увеличении содержания воды от <0,1% до 1% в подвижной фазе ДХМ/метанол (10 мМ раствор уксусной кисло­ты с 10 мМ раствором ацетата калия) в объемном отношении 80:20 получили приблизительное удвоение величины к! для всех соединений. Последующее уве­личение содержания воды от 1% до 2,5% обусловило еще большее увеличение величины к!. Это неожиданное увеличение удерживания соотнесли с тем, что при увеличении содержания воды в растворителе выше 1% она целиком запол­няет поры и покрывает поверхность сорбента. Этот водный слой не дезактиви­рует оксид кремния, как это обычно происходит в случае других определяемых соединений, а обеспечивает слой предпочтительного распределения для этих сильно гидрофильных соединений. Как и ожидали, процентное содержание ме­танола в подвижной фазе сильно влияло на удерживание. Если процентное со­держание метанола увеличивали, удерживание уменьшалось. Были приведены величины к" для подвижных фаз, содержащих 10-40% метанола. Другие изучен­ные переменные включали: 1) концентрацию буфера (величина к! быстро возра­стала при изменении концентрации буфера от 0 до 5 мМ, затем постепенно не­значительно уменьшалась при изменении концентрации буфера от 5 мМ до 960 мМ), 2) рН (величина к! сигмоидально увеличивалась при изменении рН от 3 до 7, причем график зависимости к! от рН напоминал кривые титрования индивиду­альных кислот) и 3) противоион буфера (величина к! уменьшалась при увеличе­нии жесткости противоиона, К⁺ > № > ]ЧН₄⁺ > 1л⁺). Полное разделение перечис­ленных восьми определяемых соединений, как и 3,4-диметоксибензойной и бен­зойной кислот, заняло 12 мин. Формы пиков в основном были отличными. Четыре нуклеотидных основания (тимин, урацил, 5-метилцитозин, цитозин) полностью разделили за 7 мин с использованием подвижной фазы ДХМ/мета­нол/вода (100 мМ раствор уксусной кислоты с 10 мМ буфером ацетата калия при рН 3,75) в объемном отношении 80:20:2. При тех же условиях полностью разде­лили менее чем за 10 мин шесть ароматических сульфоновых кислот (антрахи- нон-2-, бензосуберон-4-, индан-4-, бензол-, 1-нафтол- и 6-гидроксинафта- лин-2-сульфоновую кислоты). Наконец, дихлорметановые экстракты хлеба и фруктов анализировали на содержание сорбиновой и бензойной кислот. Полное разделение с полным разрешением подвижной фазой ДХМ/метанол/вода (10 мМ раствор уксусной кислоты с 10 мМ раствором ацетата калия при рН 4,75) в объемном отношении 80:20:2,3 заняло 4 мин.