САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

Фернандес и Синагоглу [483] установили, что органический растворитель может не только вызывать денатурацию белка, но и привести к максимальной стабилизации белка в его нативной конформации. Например, было найдено, что лизоцим был наиболее устойчив в растворителе метанол/вода в объемном отно­шении 8:92. Такая информация представляет потенциально большое значение для хроматографиста, но крайне редко встречается или используется.

Армстронг и сотр. [484] ввели новую разновидность схемы элюирования бел­ка. Проведено обратное градиентное элюирование от высокого содержания ор­ганики к воде, а именно ацетонитрил/вода (1% ТФК) в объемном отношении 90:10 до ацетонитрил/вода (1% ТФК) в объемном отношении 60:40. Поскольку общая зависимость для белков от содержания ацетонитрила в подвижной фазе имеет и-образную форму с минимумом к' между 30 и 45% ацетонитрила, элюирование будет происходить независимо от того, движется ли градиент от более слабого к более сильному растворителю (традиционный обращенно-фазо- вый градиент) или от более сильного к более слабому растворителю. Белок пер­воначально находится в денатурированной форме, так что главный вопрос со­стоит в том, должен ли белок быть для последующего анализа в нативной кон­формации или он будет анализирован в денатурированной форме. При последующем хроматографическом эксперименте следует учитывать, что белок уже денатурирован. Заметьте, что простые молекулы нельзя определять подоб­ным образом, так как график зависимости от содержания ацетонитрила представляет для них непрерывное уменьшения удерживания по мере повыше­ния содержания ацетонитрила.

Влияние метанола в ИПС на конформацию пептидов и белков изучено как с кинетической, так и с хроматографической точек зрения [485]. Кинетика игра­ет крайне важную роль в конформации и механизмах удерживания белков. Если время удерживания имеет тот же порядок, что и кинетика конформационных из­менений, возможно возникновение множественных пиков. Напротив, для малых циклических дипептидов главную роль в механизме удерживания будет играть предпочтительная конформация и полученная при этом площадь поверхности. Хотя детали и сложны, не следует забывать эти общие соображения, работая с белками, чтобы такие множественные пики, связанные с конформационным равновесием, не привели к ошибкам при разделении соединений.

Модификация окисленного человеческого гормона роста (чГР) была выде­лена препаративно на колонке РЬИР-Б с использованием 100-минутного гради­ентного элюирования смесью н-пропиловый спирт/вода (25 мМ буферный рас­твор ацетата аммония с рН 7,5) в объемном отношении 34:66—>39:61. Получено отличное разрешение окисленного и нативного чГР при использовании загрузки 15 мг [486]. Последующая идентификация фракций проведена методом ЖХ/МС.