Ряд белков сыворотки человеческой крови определяли с использованием широкого круга привитых фаз (С18, фенил, С8, дифенил) и градиентного элюирования смесью н-пропиловый спирт/вода (буферный раствор ацетата триэтиламина с pH 4,0) в объемном отношении 10:90—>70:30 или 0:100—>100:0. Сыворотка была охарактеризована менее чем за 60 мин [478]. Привитая фаза Ci8 давала наименьшее извлечение белков, а С8, фенил и дифенил давали извлечение >80% при общей массе введенной пробы 10 мкг. Извлечение возрастало более чем до 95% при массе пробы 100 мкг.
Отделение протамина (белок ядра репродуктивных клеток) оптимизировали на колонке Cig (А, = 220 нм) с использованием градиента 0—»7% этанола в воде с 0,2% ТФК. Авторы нашли, что как масса введенного белка, так и объемная скорость потока (0,5-1 мл/мин) оказывали значительное влияние на разделение, тогда как влияние изменения вводимого объема было минимальным [479]. Эти выводы в целом согласуются с процессом денатурации, вызываемой неподвижной фазой.
Гидролизаты а-казеина, полученные при действии протеаз Bacillus и Aspergillus, фракционировали с помощью гель-электрофореза. Затем каждую фракцию характеризовали разделением на колонке Ci8 (А, = 220 нм). Использовали 60-минутное градиентное элюирование смесью вода (0,06% ТФК)/метанол в объемном отношении 100:0—>30:70 (при 55 мин) ->9:91.
В двух работах Каргера с сотрудниками [480, 481] детально изучено влияние н-пропилового спирта на рекомбинантный человеческий гормон роста (рчГР) и его N-метионильный вариант. Влияние на хроматографический процесс температуры, pH и содержания н-пропилового спирта изучено с использованием при 45 °С колонки С4 (А,ВОзб = 295 нм, А,эм = 360 нм). Получен предел обнаружения 10 мкг/мл (S/N = 2). Оптимальное отделение рчГР от его N-метионильной разновидности получено при использовании подвижной фазы н-пропиловый спирт/вода (0,1 М фосфатный буфер с pH 6,5) в объемном отношении 78:22. Элюирование завершилось за 35 мин.
В интересном исследовании [482] обнаружили, что добавка спиртового «усилителя» к ИПС приводит к снижению общей концентрации органического растворителя, необходимого для элюирования, уменьшению степени денатурации, наблюдаемой в элюированном белке, и увеличению общего извлечения. Очень эффективными спиртовыми «усилителями» оказались 1-бутанол и 2-метил-1- бутанол. Колонка содержала дифенильный сорбент, и подвижная фаза содержала либо 0,1% ТФК, либо 0,1 М Н3Р04 (например, ИПС/2-метил-1-бутанол/вода [0,1 М Н3РО4 до рН 2,3] 33:4:63). Изучены двенадцать белков, имеющих молекулярные массы от 11 ООО (инсулин) до 160 ООО (у-глобулин). При использовании в качестве подвижных фаз н-пропилового спирта или н-пропилового спирта/1-бу- танола все степени извлечения превышали 80%, причем для большинства белков они были в диапазоне 95-100%.
|
|
|
АКЦИИ, ПРЕДЛОЖЕНИЯ |
|
Доставка бесплатно! |
Компания «Плазма» предлагает всем новым клиентам бесплатную доставку первого заказа! |
|
| |
НОВОСТИ |
|
15-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" рада сообщить, что с 15 июня 2009 года, появляется новый отдел, теперь мы готовы предоставлять промышленных альпинистов, для работ любой сложности (окраска, мойка, ремонт, реставрация). Все альпинисты имеют соответствующие лицензии. Цены дешевле средних. Звоните, будем рады помочь. |
|
01-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" успешно завершила поставку лакокрасочных материалов для ОАО "РЖД".
Ждем подписания следующего контракта. |
архив новостей...
|
|