САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

Крайне сложная и важная связь между удерживанием пептидов/белков и со­держанием органических компонентов в подвижной фазе привлекла огромное внимание. Херн и Грего [475] изучали удерживание веществ, состоящих из остатков аминокислот в количестве от 1 до 5, на колонке C_i8 с использованием изократических подвижных фаз, содержащих различные уровни метанола (т. е. спирт/вода [20 мМ фосфатный буфер срН 2,25 или 15 мМ фосфат триэтиламмо- ния с рН 2,95]). Как и ожидалось, удерживание уменьшалось с с ростом содержа­ния спирта от 0 до 50%. Однако после 50% удерживание этих определяемых ве­ществ увеличивалось с ростом концентрации метанола. Скорость увеличения за­висела как от используемого буфера, так и от состава определяемого вещества. Такое поведение не наблюдалось для изократической хроматографии миоглоби- на или апомиоглобина на колонке С₈ при использовании ИПС или этанола [476]. Полипептиды с числом остатков от 11 до 15 проявляют такое поведение с мета­нолом даже в большей степени и в меньшей степени с ИПС.

Симпсон и сотр. [477] изучали удерживание шести белков (рибонуклеаза, ци­тохром с, а-лактальбумин, альбумин бычьей сыворотки, ингибитор трипсина, овальбумин) на четырех колонках С[₈ с использованием изократических по­движных фаз, содержащих 20-95% ИПС (с 0,1 % ТФК). График зависимости к' от содержания ИПС проявляет отчетливое падение кначинающееся между 20 и 50% ИПС (в зависимости от белка и колонки), к! остается низким (<1) до тех пор, пока он не возрастет резко для всех белков в интервале между 60 и 80% ИПС. Объяснение U-образной формы графиков зависимости к! от органического мо­дификатора сосредоточено на денатурации белка. Удерживание ожидаемо уме­ньшается с ростом содержания органических компонентов, но низкие содержа­ния не приводят или приводят к малым изменениям конформации белка. По мере того, как белок денатурирует, его конформация становится более беспоря­дочной, и прежде внутренние гидрофобные аминокислотные остатки вступают в контакт с подвижной фазой. Как только этот процесс начинает протекать, уси­ливающаяся гидрофобность белка и возрастающая сила подвижной фазы ком­пенсируют друг друга и к" остается постоянным в некотором диапазоне (в зави­симости от природы определяемого вещества и органики) составов подвижной фазы. При более высоком содержании органических компонентов денатурация белка протекает в столь большой степени, что к¹ реально возрастает. Следует от­метить, что денатурация белка приводит к необратимой адсорбции или очень медленной десорбции белка с поверхности носителя. Это первичный фактор, ве­дущий к низкому извлечению белка в работах по ЖХ.