САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

Армстронг и сотр. [466] изучали удерживание БЬ-изомеров дансилзамещен- ных аминокислот как на (Я)-, так и на (5)-(нафтилэтил)карбамоил-модифициро- ванных Р-циклодекстриновых колонках. Приведены значения К и а для девяти аминокислот с широким набором заместителей, присоединенных к концевой аминогруппе. Состав используемой подвижной фазы зависел от определяемого вещества, но изменялся от этанол/уксусная кислота в объемном отношении 99:1 до этанол/ацетонитрил (+ 1% уксусной кислоты) в объемном отношении 25:75, причем наиболее часто использовали состав этанол/ацетонитрил (+1% уксус­ной кислоты) в объемном отношении 50:50.

9-Флуоренилметилхлорформиат (БМОС) использовали в методике предко- лоночной дериватизации аминокислот. Разделение 30 остатков проведено за 23 мин с использованием колонки С[₈ (А,_В03б ⁼ 263 нм, А,_эм = 313 нм) и градиентно­го элюирования смесью метанол/вода (25 мМ фосфат аммония с рН 6,5) в объем­ном отношении 18:82—»99:1. Удалось легко детектировать аминокислоты на уровне не ниже 100 пмоль [467].

В качестве реагента для предколоночной дериватизации при определении десмозина, изодесмозина и 17 других аминокислотных остатков использовали нафталиндиальдегид [468]. В качестве аналитического преимущества (по срав­нению с производными о-фталевого альдегида) называются более устойчивые комплексы. Получен предел обнаружения 100 фмоль (S/N = 2) и анализ проведен менее чем за 35 мин. Использовали колонку Ci₈ (А._возб = 420 нм, А,_эм = 490 нм) и градиентное элюирование смесью метанол/ТГФ/вода (5мМ цитрат натрия) в объемном отношении 10:5:85—»63:1:36. Дополнительно контролировали ами­нокислоты электрохимически (+750 мВ относительно Ag/AgCl). Форма пиков была хорошей, но полного разделения всех остатков добиться не удалось.

4.6.2. Пептиды

Ряд имидазольных дипептидов (карнозин, ансерин [см. с. 210], баленин, гистидин, 1-метилгистидин, 3-метилгистидин, гомокарнозин) выделили из лошадиной мышцы, дериватизировали с о-фталевым альдегидом непосредственно перед определением и разделили на колонке Qs (А,_в03б = 340 нм, А,_эм = 450 нм). Использо­вали сложное 45-минутное градиентное элюирование смесью (вода [12,5 мМ аце­тат натрия с pH 7,2]/ТГФ 995:5)/(вода [12,5 мМ ацетат натрия с pH 7,2]/мета- нол/ацетонитрил 55:35:15) в объемном отношении 100:0—>0:100. Заметьте, что при приготовлении буфера используют изомолярные количества ацетата натрия (1,026 г/л) и уксусной кислоты (0,751 г/л). pH полученного водного раствора дол­жен быть равен рК_а уксусной кислоты (4,76). Формы пиков были отличными, то­лько пики 1-метилгистидина и 3-метилгистидина не были разрешены полностью. Рабочие стандартные растворы были приготовлены в диапазоне 0,01-1 мМ [469]. Пределы обнаружения составили 0,01 ммоль/кг (S/N = 3).