САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

Изоаспарагиновую кислоту, выделяемую при дезамидировании аспарагина из пептидов и белков, определяли на колонке С18 (к = 254 нм) с использованием градиентного элюирования смесью (вода [25 мМ КН₂Р0₄ с октансульфоновой кислотой до рН 3,2]/метанол 90:10)/метанол в объемном отношении 85:15—>50:50 (при 10 мин, выдерживали 5 мин)—»0:100 (при 18 мин, выдержива­ли 3 мин) [462]. Изоаспарагиновая кислота, 8-аденозил-Ь-метионин и 8-адено- зилгомоцистеин разрешены менее чем за 16 мин. Концентрации стандартных растворов менялись от 0,02 до 2 мМ.

С использованием двух отдельных методов ВЭЖХ с дериватизацией прово­дили одновременное определение глутатиона (трипептид), у-глутамилцистеина и 16 аминокислот. о-Фталевый альдегид (ОФА) использовали для всех соедине­ний, а монобромбиман (МББ) — только для тиолов. В обоих методах использо­вали колонку С! 8 (флуоресцентное детектирование с фото диодной матрицей и фильтрами). Производные ОФА разделили очень хорошо с использованием 100-минутного градиентного элюирования смесью (вода [20 мМ №Н₂Р0₄ с рН 6,8]/метанол 90:10)/(вода [20 мМ №Н₂Р0₄ с рН 6,8]/метанол 40:60) в объемном отношении 100:0 (выдерживали 5 мин)—»70:30 (при 45 мин)—»0:100 (при 90 мин, выдерживали 10 мин) [463]. Приведены градуировочные графики в диапазоне от 0,01 до 1 нмоль на введенное количество вместе с таблицей времен удерживания и относительными сигналами для всех соединений. Глутатион, у-глутамилци- стеин и цистеин разделили за 12 мин с использованием градиентного элюирова­ния смесью (вода [0,25% уксусной кислоты до рН 4,3 с №ОН]/метанол 90:10)/(вода [0,25% уксусной кислоты до рН 4,3 с №ОН]/метанол 10:90) в объемном отношении 100:0—»88:12.

Аминокислоты плазмы крови разделили в виде их производных с о-фтале- вым альдегидом менее чем за 20 мин на колонке С_]8 (л_в<Г!б = 230 нм, Х_эм = 389 нм) с использованием градиентного элюирования смесью (вода/вода [9 мМ КН₂Р0₄ с 0,5 М ТЭА до рН 6,9] 50:50)/(метанол/ацетонитрил/вода [9 мМ КН₂Р0₄ с 0,5 М ТЭА до рН 6,9] 35:15:50) в объемном отношении 98:2-»0.Т00 [464]. Получена линейная зависимость флуоресцентного сигнала от концентрации в диапазоне от 5 до 800 мкмоль/л. Следует отметить, что разделение было выполнено с пол­ным разрешением менее чем за 12 мин, но требуется значительное время между вводами пробы для восстановления равновесия в колонке.

Одиннадцать дансильных производных изомеров аминокислот разделили на Р-циклодекстриновой колонке (X = 254 нм) с использованием подвижных фаз метанол/вода (фосфатный буфер ионной силы 0,2 М с рН 6,5) [465]. Содержание метанола, необходимое для разделения, менялось от 15 до 25%. При содержании метанола 15% четыре группы энантиомеров (глутамин, серин, норвалин, нор- лейцин) были частично разрешены менее чем за 30 мин. Авторы утверждают, что вода является неотъемлемым компонентом подвижной фазы, но следующая работа дает четкие аргументы против этого утверждения.