САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

Какой процесс следует за проведением разделения с использованием пробно­го градиента (рис. 2.9)? При наложении профиля градиента на хроматограмму получается интересный результат. [Заметим, что очень важно учитывать объем (время) пребывания, т. е. объем в системе между точкой создания градиента (в насосе) и входом колонки. Для компенсации этого времени пребывания линия градиента должна быть смещена.] Из времени элюирования каждого пика и со­става подвижной фазы в момент элюирования получают оценку силы раствори­теля, необходимой для элюирования определяемого вещества. Найдя состав по­движной фазы для всех пиков, можно получить примерный состав подвижной фазы, позволяющий разрешить все пики. Это самая слабая подвижная фаза, не­обходимая для элюирования первого пика. К сожалению, этот состав подвижной фазы не обеспечивает наименьшего полного времени элюирования. Поэтому проводят эксперименты в изократических условиях между наиболее слабым и наиболее сильным составами, определяемыми с помощью пробного градиента. Важно также помнить, что в протокол оптимизации следует включать серии пробных градиентов, которые используют компоненты подвижной фазы, даю­щие исключительную селективность (например, ТГФ).

Метод пробного градиента особенно подходит для тех анализов, когда быва­ет нужно разделить большое число определяемых веществ. Быстрое изменение силы подвижной фазы вплоть до очень больших значений приводит к элюирова- нию всех соединений за короткое время. Следует использовать линейный гради­ент, поскольку в этом случае найти изократические условия наиболее просто.

Для сложных проб изократическое разделение может быть неоптимальным. В этих случаях пробный градиент является основой для оптимизации градиент­ного разделения. Для тех областей на хроматограмме, где происходит совмест­ное элюирование многих пиков, может потребоваться плато на градиенте, после чего следует другой градиент. Несмотря на все это, пробный градиент дает боль­шое количество информации и указывает пути дальнейшей оптимизации.

2.4. Оконные диаграммы

Оконные диаграммы строят, используя такой параметр, определяющий разделе­ние пары соединений, как степень разделения а. Как показал Деминг [66,67], этот подход особенно удачен для слабых органических кислот. В этих случаях строят график зависимости а от рН растворителя. «Окна», создаваемые под этой кривой, дают оптимальное разрешение для любых пар растворенных веществ. Для нахож­дения оптимальных рабочих хроматографических условий следует также принять во внимание разумные времена удерживания и т.п.