САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

На практике приборы 'некоторых производителей уже имеют «автоматиче­ские» программы оптимизации, что упрощает процесс.

Во всех случаях такие подходы используют для нахождения изократической системы растворителей, которая обеспечивает оптимальное разрешение всех пиков. Полное или приемлемое разрешение не гарантируется, поскольку этот метод оптимизации не может предсказать емкость колонки (т.е. наибольшее число пиков, которые можно разрешить за данное время). Значит, приемлемое разделение, в том смысле как его определяет хроматографист, может быть воз­можным только при градиентном элюировании. Типичный пример триангуля­ционного подхода приведен на рис. 2.8. Основные итерации здесь проведены ис­ходя из нижнего правого угла треугольника, показанного на рис. 2.5, а (т. е. по рис. 2.5, б). Каждая хроматограмма представляет разделение, проведенное с ис­пользованием состава подвижной фазы, соответствующего указанной точке. Наилучшее разделение получено для точки 2. Заметим, что подвижные фазы, от­вечающие точкам 4,6 и 8, приводят к очень похожим хроматограммам, различа­ющимся лишь по полному удерживанию, тогда как 100%-ный ацетонитрил дает только один пик — все вещества элюируются одновременно. Чтобы получить полное разрешение пиков, можно сделать небольшие изменения состава по­движной фазы, представленного точкой 2.

2.3. Пробный градиент

Общим недостатком всех описанных выше методов оптимизации является то, что хроматографист никогда не гарантирован, что все пики будут элюироваться или что все они не будут элюироваться в мертвом объеме. Следует отметить, что опи­сываемый метод, хоть и является градиентным по природе, служит для того, что­бы установить, существует ли изократический состав подвижной фазы, удовлет­воряющий требованиям аналитиков к разделению.

С целью выбора рабочих условий Шоимэйкерс и др. [62-65] оценивали неоп­ределенность элюирования с использованием схемы быстрого градиента. Начи­ная со слабого растворителя (например, вода/ацетонитрил/метанол с объемным отношением 80:10:10 для ОФ системы) и быстро меняя состав в сторону наибо­лее сильной ожидаемой подвижной фазы (например, вода/ацетонитрил/метанол 20:40:40), удается элюировать все пики за разумное время и получить пример­ные границы для следующего градиента, устанавливая состав слабого раствори­теля соответствующим первому элюирующемуся пику, а состав сильного рас­творителя — последнему элюирующемуся пику (см. рис. 2.9). Слабый раствори­тель первоначально должен быть слабее, чем необходимо для элюирования первого пика, так чтобы не происходило элюирования в мертвый объем. Анало­гично наиболее сильная подвижная фаза должна быть сильнее, чем необходимо для элюирования последнего пика, чтобы обеспечить разумные времена экспе­римента. Если имеет место полная неопределенность относительно характери­стик удерживания определяемых веществ, тогда сначала следует выполнить градиент от 100%-ной слабой до 100%-ной сильной подвижной фазы. И в этом методе выбор используемых растворителей ограничен лишь соображениями растворимости, поскольку каждый резервуар может содержать смесь раствори­телей. Эта процедура дает возможность быстро оценить выгоду от использова­ния растворителя в любом конкретном разделении.