САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

1.15. Влияние растворителя на флуоресценцию

Использование флуоресценции для детектирования в ВЭЖХ часто бывает предпоч­тительным, потому что она обычно дает наиболее низкие пределы обнаружения и наиболее высокую чувствительность среди обычно используемых детекторов. Обычно улучшается специфичность, поскольку число флуоресцирующих раство­ренных веществ ограниченно. Эти свойства дают хроматографисту возможность определять низкие концентрации интересующего вещества, которое флуоресциру­ет, на фоне высоких концентраций нефлуоресцирующих мешающих веществ. Ког­да мешающее вещество тоже флуоресцирует, возможна дополнительная дискрими­нация с помощью детектора путем «тонкой настройки» длины волны возбуждения и разумного выбора длины волны испускания для анализа.

Разработан широкий диапазон флуоресцентных реагентов и методик дерива- тизации, чтобы использовать аналитические преимущества, которые дает флуо­ресценция. Эти реагенты для дериватизации обычно специфичны к функциональ­ным группам (например, амино-, гидрокси-, тиольным группам), и эта специфич­ность дает еще одну возможность устранить влияние мешающих веществ. Превосходные обзоры читатель найдет в ссылках [38] и [39].

Выбор флуоресцентной метки зависит от типа дериватизации (например, предколоночной или послеколоночной), потому что устойчивость химических связей определяемое вещество-метка сильно варьирует. Следовательно, для предколоночной дериватизации важно установить временную задержку между дериватизацией и определением, а также устойчивость продукта реакции в по­движной фазе еще до разработки методики ВЭЖХ. Для послеколоночной дери­ватизации следует рассмотреть совместимость реакционного растворителя с хроматографической системой, а также скорость реакции.

Если нельзя найти реагент для флуоресцентной дериватизации, который не флуоресцировал бы до реакции (и, следовательно, не детектировался), но флуо­ресцировал в качестве метки (например, часть реагента, которая химически свя­зана с определяемым веществом), тогда важно знать время элюирования избыт­ка непрореагировавшего реагента, поскольку он часто дает крайне большой пик по сравнению с определяемым веществом.

Взаимодействия растворитель — растворенное вещество очень важны при флуоресцентных определениях. Эти взаимодействия оказывают большое влия­ние на воспроизводимость, пределы обнаружения и чувствительность метода. Во-первых, для соединений с и—»гс* переходами (например, кетонов) в неполяр­ных и апротонных растворителях (например, алканах и простых эфирах) флуо­ресценция мала или отсутствует. Однако в протонных растворителях (например, метаноле) эти соединения флуоресцируют. Напротив, соединения с п—>п* пере­ходами (например, полициклические ароматические углеводороды) хорошо флуоресцируют в неполярных растворителях и хуже — в протонных.