САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

Мы приглашаем вас насладиться красками природы, посетив галерею фотографий.

Реклама

комплексные поставки лакокрасочных материалов

лаки, краски, эмали, грунтовки, шпатлевки

В заключение отметим, что неустойчивость или уникальные свойства раствори­теля могут привести к ситуациям, когда проба, растворитель, колонка или целост­ность системы будут подвергаться опасности. Понимание природы растворителя и его возможной химической активности сбережет хроматографисту немало времени и позволит избежать неточных или неверных результатов.

1.12. Устойчивость пробы в растворителях

Совершенно отдельный, но все же крайне важный аспект совместимости про­ба/растворитель — это устойчивость пробы в растворителе. Существует три от­четливых сценария.

1. Рассмотрим общую устойчивость пробы в подготовительном (т. е. при подготовке пробы) растворителе. Заметим, что этот растворитель может быть или не быть идентичным подвижной фазе (хотя обычно рекомендуют, чтобы подготовительный растворитель и подвижная фаза были одинаковыми, чтобы избежать образования системных пиков и т. д.). Пробы (включая образцы срав­нения) в течение большого времени взаимодействуют с подготовительным рас­творителем. Время от завершения пробоподготовки до реального анализа часто составляет часы. В некоторых примерах показано, что это критично в случаях денатурации белков в растворителях [31] и на колонках [32]; разложения произ­водных определяемых веществ [33]; влияния времени, температуры и света

в случае аскорбиновой кислоты [34]; разложения пестицидных остатков на но­сителях, таких как графитированный углерод и кремнезем С^ [35].

2. Когда проба приготовлена не в самой подвижной фазе, могут быть пробле­мы с равновесием при введении пробы в подвижную фазу. Например, если проба приготовлена в растворителе, имеющем большую силу, чем подвижная фаза, то при разбавлении введенной зоны подвижной фазой может произойти превыше­ние растворимости. Этот тип неравновесной перегрузки пробой может привести к образованию более пологого переднего фронта пиков (рис. 1.16).

3. Третий сценарий, связанный со вторым, имеет место, когда пробы готовят в более слабых, чем подвижная фаза, растворителях. Классический пример представляют белки. Белок часто растворяют в водной буферной системе и впо­следствии вводят в подвижную фазу, содержащую значительную концентрацию органического модификатора. Когда уровень органики слишком высок (напри­мер, более 20 об. % ацетонитрила), белок может подвергаться денатурации и осаждаться из подвижной фазы на носитель колонки [36].

Исходя из вышесказанного, легко сделать вывод о важности сведений о взаи­модействии проба/растворитель (помимо химических реакций). Один практиче­ский способ определения устойчивости заключается в приготовлении стандарт­ного раствора в начале процедуры аттестации метода. Используйте эту пробу в качестве проверочного образца сравнения в продолжение процедуры аттеста­ции. Построение графика зависимости найденного содержания от времени дает точную оценку приемлемого времени «жизни на полке» определяемого вещест­ва в подготовительном растворителе.