Другой путь избежать нежелательного расслоения фаз — это сделать систему растворителей насыщенной одним компонентом. Например, отдельный водный слой приводят в контакт с гексаном, затем раствор постоянно перемешивают, чтобы обеспечить насыщение гексана водой. К сожалению, растворимость тоже зависит от температуры, так что система растворитель/колонка должна иметь регулируемую температуру, чтобы гарантировать стабильные и воспроизводимые хроматографические результаты.
1.9. Буферы и другие добавки для подвижных фаз
Как описано выше, модификаторы подвижной фазы (МПФ) содержатся в малых концентрациях — обычно 2% или менее. МПФ представляют собой добавки или буферы. Добавки присутствуют в определенном количестве, а итоговое равновесие задает характеристики растворителя. Буферы — это МПФ, которые добавляют для поддержания постоянства какой-либо определенной характеристики подвижной фазы; обычно эторН. Примерами МПФ, являющихся добавками, служат 0,1% триэтиламина (ТЭА), 0,2% трифторуксусной кислоты (ТФК), 1% фосфорной кислоты и 50мМ додецилсульфата натрия.
Буферы обычно представляют собой смеси твердых веществ или жидкого и твердого вещества. Примерами буферов являются ацетатный (50 мМ при рН 4,0), фосфатный (100 мМ при рН 7,0) буферы и 0,1% ТЭА/ 0,1% ТФК. Поскольку использование буферов в ОФ хроматографии общепринято, очень важными являются основные сведения по растворимости каждого компонента буфера в подвижной фазе. Рассмотрим случай фосфорной кислоты и ряд ее сопряженных пар кислота/основание в качестве буфера для подвижной фазы ацетонит- рил/вода. Фосфаты имеют незначительное УФ поглощение вплоть до 200 нм (см. рис. 1.5, в), не вызывают денатурации белков и имеют три эффективные буферные области при рН, близких к 2, 7 и 12. Эти свойства делают фосфатные буферы весьма привлекательными для многих приложений ВЭЖХ.
Использование буферов — это обычная практика, оно крайне необходимо во многих методиках и поэтому заслуживает пристального рассмотрения. Как упомянуто выше, буферы для ВЭЖХ используют в основном для контроля иона водорода РГ в растворе. Концентрацию ионов водорода [Н+] представляют с помощью шкалы значений рН, где рН = -^[Н1].
Буферы подбирают, исходя из их констант диссоциации. Например, константа диссоциации уксусной кислоты Ка равна 1,7 • 10 5 (ее выражают также значением рКл = 4,76). Химическое равновесие для уксусной кислоты представляют следующим образом:
|
|
|
АКЦИИ, ПРЕДЛОЖЕНИЯ |
|
Доставка бесплатно! |
Компания «Плазма» предлагает всем новым клиентам бесплатную доставку первого заказа! |
|
| |
НОВОСТИ |
|
15-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" рада сообщить, что с 15 июня 2009 года, появляется новый отдел, теперь мы готовы предоставлять промышленных альпинистов, для работ любой сложности (окраска, мойка, ремонт, реставрация). Все альпинисты имеют соответствующие лицензии. Цены дешевле средних. Звоните, будем рады помочь. |
|
01-06-09 |
ООО "ПЛАЗМА" успешно завершила поставку лакокрасочных материалов для ОАО "РЖД".
Ждем подписания следующего контракта. |
архив новостей...
|
|